一步净化法用于动物源性食品中53种多类别兴奋剂与激素残留的高通量筛查

摘要：本研究建立了一种高效、灵敏的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，用于筛查动物源性食品中53种兴奋剂。样品经2%甲酸-乙腈/水（80/20，v/v）溶液提取，利用FaVEx-AP固相萃取柱进行一步净化，以C18色谱柱（100 mm × 2.1 mm × 1.8 μm）进行分离，采用多反应监测模式进行质谱分析。方法验证结果表明，53种目标化合物在0.25–10 μg/kg范围内线性关系良好，相关系数（R²）均大于0.99，检出限为0.25–10 μg/kg，定量限为1–10 μg/kg。样品加标回收率在62.25%–123.32%之间，相对标准偏差（RSD）为1.17%–22.03%。本方法前处理简便、快速，净化效果好，灵敏度高，适用于猪肉、鱼肉、鸡肉等动物源性食品中多种兴奋剂的同时筛查与定量检测。

本方法采用酸性乙腈溶液对动物源性食品中的53种兴奋剂进行有效提取。通过创新的FaVEx-AP固相萃取柱进行一步净化，能够高效去除油脂、蛋白质等基质干扰，净化流程快速简便。采用LC-MS/MS在dMRM模式下进行检测，通过优化色谱梯度与质谱参数，实现了53种不同极性化合物在8分钟内的高效分离与准确定性定量。

一、 实验方法

1. 样品前处理流程：

· 准确称取一定量的样品于50 mL离心管中。

· 加入10 mL0.2%甲酸-乙腈/水（80/20, v/v）提取液。

· 剧烈振荡15分钟。

· 于5000 r/min离心5分钟。

· 取一定体积的上清液FaVEx-AP净化柱进行净化，流速控制为每秒1滴。

· 收集全部流出液，取2 mL于氮吹仪中吹干。

· 用1 mL10%甲醇水溶液（10/90, v/v）复溶。

· 溶液经0.22 μm有机滤膜过滤后，供LC-MS/MS分析。

2、标准溶液的配制

1. 标准储备液（1 mg/mL）：分别称取适量各兴奋剂标准品，用甲醇溶解并定容，配制成1 mg/mL的单一标准储备液，于-18°C避光保存。

2. 混合标准工作溶液（1.0 μg/mL）：准确吸取适量各单一储备液，用甲醇稀释，配制成53种目标物浓度均为1.0 μg/mL的混合标准工作溶液，于-18°C避光保存。

3. 基质匹配标准曲线溶液：使用经前处理净化后的空白样品基质溶液，逐级稀释混合标准工作溶液，配制系列浓度的基质匹配标准曲线溶液（浓度点通常包含：1, 2, 5, 10, 20, 50, 100 ng/mL等），现用现配。

二、 仪器分析条件：色谱条件

· 色谱柱： C18 (2.1 × 100 mm, 1.8 μm)

· 柱温： 40 °C

· 流动相：

o A相： 2 mM甲酸铵水溶液（含0.01%甲酸）

o B相： 乙腈

· 流速： 0.40 mL/min

· 进样量： 5 μL

· 梯度洗脱程序：

质谱条件

· 离子源：电喷雾电离源

· 扫描模式： 正离子模式（ESI⁺）

· 监测模式： 动态多反应监测（dMRM）

· 离子源参数：

o 气帘气：10 L/min

o 雾化气：45 psi

o 辅助加热气：11 L/min

o 离子源温度：325 °C

o 喷雾电压：+3500 V

三、回收率与精密度数据

下表列出了53种兴奋剂在猪肉基质中添加水平分别为1倍定量限、2倍定量限和5倍定量限时的平均回收率及相对标准偏差（RSD, n=6）测试的药剂清单如下：

α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、3-甲氧基可尔特罗、福莫特罗、阿替洛尔、班布特罗、倍氯米松、苄氟噻嗪、倍他米松、宝丹酮、溴布特罗、卡替洛尔、坎利酮、氯噻嗪、西布特罗、克仑特罗、克仑塞罗、克仑异己特罗、克仑潘特罗、克仑丙罗、氯丙那林、可尔特罗、可的松、地塞米松、氟氢可的松、肾上腺素、氢化可的松、羟甲基克仑特罗、异舒普林、马布特罗、马喷特罗、美雄酮、甲基泼尼松龙、美托洛尔、诺龙、奥达特罗、泼尼松龙、普萘洛尔、莱克多巴胺、沙丁胺醇、螺内酯、特布他林、丙酸睾酮、托拉塞米、群勃龙、曲托喹酚、氨苯蝶啶、妥洛特罗、齐帕特罗

兴奋剂与激素残留的高通量筛查"style="color:red"/>兴奋剂与激素残留的高通量筛查"style="color:red"/>

注：表中“—”表示原文献在该加标水平下未提供相应数据。

四、结论

本研究成功开发并验证了一种基于LC-MS/MS结合FaVEx-AP净化柱技术的检测方法，用于动物源性食品中53种兴奋剂的高通量筛查。该方法具有以下显著优点：

1. 前处理高效简便：采用一步式固相萃取净化，大幅缩短了样品前处理时间。

2. 分析速度快：8分钟内完成53种化合物的色谱分离。

3. 灵敏度高、准确性好：方法检出限低，定量准确，各项方法学指标均满足残留检测的技术要求。

4. 适用性广：经猪肉、鱼肉和鸡肉基质验证，表明该方法适用于多种动物源性食品基质。

本方法为食品安全监管实验室提供了一种可靠、高效的兴奋剂多残留检测解决方案，具有良好的应用前景。