以FaTEx-gen快速净化萃取套组搭配液相层析串联质谱分析谷类样体中之多重霉菌毒素

以FaTEx-gen快速净化萃取套组搭配液相层析串联质谱分析谷类样体中之多重霉菌毒素

应用批注

霉菌毒素

绪论

霉菌毒素为霉菌增殖时产生的次级代谢产物，常见于生活中，且霉菌的孢子能透过空气、风力、水流和动物等方式来传播。只要有少量蛋白质、淀粉、脂质及水份，就是适合真菌生长的环境，因此麦类、果实类、玉米及花生都是真菌主要的生长处。黄曲毒素具有潜在性的肝毒害（hepatoxin）及致癌性，其化学特性使其能于运输储存期间稳定存在，因此霉菌毒素易出现在食物链中；且除了直接食用受感染的食物，也可能透过喂食受污染饲料给动物而间接暴露于相关风险。

　　霉菌毒素污染食品和饲料对于全球性作物及动物养殖产业影响甚巨，据估计每年约25%农作物受到不同程度的霉菌毒素影响，单以美国和加拿大而言，真菌毒素即造成饲料业和家畜业每年损失约50亿美金(IFST, 2006)。

　　本篇应用以FaTEx-gen快速净化萃取套组进行前处理，搭配LC-MS/MS检测黄曲毒素的含量，建立一套快速的检测方法，利于维护饲料质量及相关作物食品安全。

摘要

本研究以FaTEx快速净化萃取套组，分析谷类样品中之十一项霉菌毒素，包含黄曲毒素类、赭曲毒素A及镰孢菌毒素类（伏马毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）、玉米赤霉毒素等），项目列表详见表1。

　　针对霉菌毒素的检测，通常会依其种类选用相对应的特化免疫亲和管进行分析。此类免疫亲和管柱的分析效能具有专一性，因此能分析的项目较限缩，通常为专项，或者有较多项的例如黄曲毒素专用管则可同时分析黄曲毒素 B1、B2、G1、G2四项。然而在欲达成各种类多重毒素分析的目的时，于检测时程上便会较耗时，且使用相对应特化管柱的成本也高许多。

　　本篇使用FaTEx净化套组，搭配ZORBAX Eclipse Plus C18通用管柱及Agilent 6470液相层析串联式质谱仪，检测黄豆及花生样品，样品之标准品添加浓度如表二；样品制备流程如下，样品秤样后加标静置，加入12mL 70:30 (v:v)乙腈/水溶液（含0.5%甲酸）以高速震荡机震荡30分钟，于3500rpm离心5分钟，取上清液5mL经过FaTEx套组净化，取检液1.2mL以氮气吹至微干，再以1mL 50:50 (v:v)乙腈/水溶液回溶。分析结果如表三所示，回收率落在81.9~112.7%范围内，CV%皆小于20，显示此为一快速、稳定之检验方法。

前处理步骤

液相层析参考条件

移动相流速：0.4 mL/min

进样体积：5µL

层析管柱：ZORBAX Eclipse Plus C18   Rapid Resolution HD   1.8μm,内径3.0 × 100 mm

流动相溶液

表1、霉菌毒素11项药剂之多重反应侦测模式参数

結論

本篇以FaTEx-gen萃取净化套组搭配ZORBAX Eclipse Plus C18管柱于液相串联质谱之分析方法，检测谷类样品（黄豆及花生）之多重霉菌毒素（黄曲毒素类、赭曲毒素A及镰孢菌毒素类）共11项，每次分析时间13分钟，为快速之检验方法。

FaTEx-gen萃取净化套组可针对复杂检体基质加强净化，降低基质干扰。

以FaTEx-gen套组检测添加多重毒素标准品之谷类样品（添加浓度：黄曲毒素B1 Aflatoxin B1,黄曲毒素B2  Aflatoxin B2,  黄曲毒素G1  Aflatoxin G1,  黄曲毒素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A  Ochratoxin A：2.5 ng/g，T-2 toxin, HT-2 toxin：5 ng/g；呕吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone：25 ng/g；伏马毒素 B1  Fumonisin B1,伏马毒素 B2  Fumonisin B2：100 ng/g）回收率落在81.9~112.7%范围内，变异系数皆小于20，为稳定之检验方法。